La principessa Luna è un unicorno alato, sorella di Celestia. Nella seconda stagione, ella ha un manto di colore blu scuro e nero, gli occhi azzurri e la chioma blu scuro punteggiata di astri, fluente e semitrasparente sui bordi come quella di Celestia; possiede inoltre un portamento regale e una figura sovrastante e più alta della media (analogamente alla sorella). Nella sua prima apparizione[3], invece, la principessa ha un manto più chiaro e la criniera azzurra, ed è di media altezza.
Anticamente, come viene narrato nell'introduzione al primo episodio[5], la principessa regnava su Equestria insieme alla sorella maggiore, e il suo compito era far sorgere la luna e far calare la notte. Tuttavia, con il passare del tempo, Luna maturò un sentimento di rancore verso la sorella, in quanto i pony sembravano godere solo del dì portato loro da Celestia, mentre la notte la passavano addormentati. La principessa, un giorno, si ribellò a Celestia rifiutandosi di far tramontare la luna e, a causa dell'amarezza presente nel suo cuore, si trasformò in Nightmare Moon (il nome è anche scritto Night Mare Moon), «un mostro tenebroso»[5]. Celestia fu costretta ad adoperare il potere degli Elementi dell'armonia e a esiliare la sorella all'interno della luna, dove ella rimase prigioniera e in solitudine per mille anni; durante questo periodo, Nightmare Moon appariva come un'enorme figura scura sulla faccia della luna (come un mare lunare)[62].
Nightmare Moon riesce a liberarsi dalla prigionia durante «il giorno più lungo del millesimo anno», come predetto da una vecchia leggenda, e fa la sua comparsa proprio durante la Festa del Sole d'Estate, presagendo ai pony di Ponyville una notte eterna[63]. In mancanza di Princess Celestia, misteriosamente sparita, Twilight e le sue ancora poco conosciute compagne partono alla ricerca degli Elementi dell'armonia, e grazie alla collaborazione e all'amicizia riescono a prevalere su Nightmare Moon, trasformandola di nuovo in Luna; questa, riappacificatasi con Celestia, torna a regnare su Equestria al fianco della sorella[3].
Collegata alla (presunta) leggenda di Nightmare Moon è la festività di Notte degli Incubi (in lingua originale. "Nightmare Night"), una sorta di Halloween che ricorre annualmente in Ponyville[37]. In questa occasione, vengono offerti dolci a una statua di Nightmare Moon per placare la sua fame ed evitare che «divori i pony in un sol boccone». Durante la Notte degli Incubi successiva al suo ritorno, Luna si manifesta ai pony di Ponyville, che però ne sono spaventati: la principessa, infatti, essendo rimasta sola per un millennio, adotta un modo di fare "antiquato", adoperando espressioni e termini arcaici (ad esempio pray tell, thou, speakest, nay, hath), riferendosi a se stessa con il plurale majestatis (the royal we) e parlando con un tono fortissimo e intimidente (the traditional Canterlot voice, "la voce tradizionale di Canterlot"). Grazie all'aiuto di Twilight, tuttavia, Luna impara man mano a integrarsi con gli altri pony e a imparare che cosa sia il divertimento, prima a lei sconosciuto.
Luna compare in diverse occasioni a seguito della Notte degli Incubi. Durante il matrimonio di Shining Armor e Princess Cadance, ella ha il compito di sorvegliare la città di Canterlot durante la notte[59]; quando Celestia invia Twilight all'Impero di Cristallo per sventare la minaccia di Re Sombra, Luna si offre volontaria ad andare anch'ella, temendo per la buona riuscita della missione[18]. Successivamente, Luna soccorre Scootaloo quando questa è in preda agli incubi, affermando che, in quanto principessa della notte, «è suo dovere venire nei [suoi] sogni»; in seguito, Scootaloo vede il profilo della principessa stagliarsi sulla luna, e ode la sua voce darle un consiglio[24]. Nel finale della terza stagione, Luna è presente assieme a Cadance alla solenne cerimonia d'incoronazione della principessa Twilight Sparkle[4].
INDIZI: 1a imm. Pony di terra dal manto bianco panna e una criniera a strisce bianche e azzurrine chiare.
2a imm.Una pony di terra dal manto rosa chiaro e una criniera viola scura. Stilista di professione e rivale di Rarity alla Settimana della moda a Manehattan, si presenta a questa come una sua ex-amica di Ponyville e riesce a farsi regalare una pregiata stoffa, con la quale crea una linea di abbigliamento da presentare alla sfilata spudoratamente copiata da quella di Rarity. Incontrando Rarity dopo che questa è stata dichiarata vincintrice in contumacia, mente dicendo di aver vinto lei nella speranza che il mancato reclamo del premio da parte di Rarity risulti nella propria vittoria.
3a imm. Una giovane bufala della tribù di Capo Zoccoli Tonanti; di color marrone chiaro, con gli occhi neri e la chioma arancione, porta una fascia piumata in fronte. A differenza di Zoccoli Tonanti, ella si esprime correttamente anche nella traduzione italiana.
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